5a. Résumé
Contexte: Afin de réduire le besoin de cornées de donneurs, la compréhension de la cicatrisation cornéenne est d'une importance primordiale. Nous avons montré une importante réduction de l’expression du gène codant la Clusterine (CLU) durant la guérison des plaies dans des cornées humaines reconstruites par génie tissulaire (hTEC). L’objectif de cette étude est d’étudier la régulation de l’expression de CLU dans les hTEC suite à une lésion.
Méthodes: Le promoteur du gène CLU a été analysé par la transfection de 9 plasmides portant différents segments du promoteur CLU couplés au gène rapporteur CAT dans des cellules épithéliales de cornée humaine (CECHs). La fixation de facteurs de transcription (FTs) au promoteur CLU a été étudiée par retard sur gel de polyacrylamide (EMSA). Leur expression a été aussi analysée par Western.
Résultats: Ces analyses ont révélé la présence de 3 régions régulatrices: 2 régions régulatrices négatives et un promoteur basal qui porte des sites de liaison à l'ADN pour les FTs AP-1 et Sp1/Sp3. Les analyses EMSA ont démontré que les sites de liaison de ces FTs se chevauchent mais également que l'expression de ces FTs est réduite (au niveau des protéines) pendant la cicatrisation des plaies hTEC, contribuant à l'extinction de l'expression du gène CLU.
Conclusions: Nos résultats améliorent la compréhension des mécanismes de répression du gène CLU lors de la cicatrisation cornéenne en exploitant les hTECs, un modèle d’étude in vitro novateur.
