Un système génétique pour étudier les ribosomes contentant les paralogues Rps18A et Rps18B de la levure Saccharomyces cerevisiae

Les ribosomes d’une cellule ne sont pas tous identiques. Ils diffèrent, entre autres, par leur composition en protéines ribosomiques. Il semble que cette hétérogénéité pourrait conférer une spécificité aux ribosomes. Nous utilisons la levure Saccharomyces cerevisiae comme modèle pour mieux comprendre l’hétérogénéité fonctionnelle des ribosomes. La plupart des protéines ribosomique de la levure sont encodées par une paire de gènes paralogues. C’est le cas de la protéine ribosomique uS13 issue des gènes RPS18A et RPS18B. Afin d’étudier les différences fonctionnelles entre ces paralogues, nous avons d’abord comparé des souches délétées pour l’un ou l’autre de ces gènes. La souche rps18a∆ avait une croissance plus lente que la souche rps18b∆, ce qui suggère une différence fonctionnelle entre les paralogues. Nous avons introduit un épitope HA ou MYC à l’extrémité N-terminale des protéines uS13 afin de les distinguer et nous avons démontré que les deux constructions pouvaient complémenter une souche où les deux gènes RPS18A et RPS18B sont éliminés (nommée s18∆∆). Avec ce système génétique, nous serons en mesure de suivre parallèlement HA-S18A et MYC-S18B lors de la formation des ribosomes. Nous pourrons aussi déterminer si elles portent des modifications post-traductionnelles distinctes (analyses par spectrométrie de masse) et analyser si elles font partie de ribosomes spécialisés dans la traduction d’ARNm spécifiques (profilage ribosomique).