206 - Organismes vivants

La bactérie Aeromonas salmonicida est un pathogène opportuniste des milieux aquatiques qui cause une maladie nommée furonculose chez les salmonidés. Le séquençage de la souche 01-B526 d'A. salmonicida par la technologie du pyroséquençage a permis de trouver la présence d'un prophage qui pourrait avoir une influence sur la virulence de la bactérie. Le prophage a une taille de 50 kb et certains de ses cadres ouverts de lecture (ORFs) coderaient pour de potentiels facteurs de virulence. L'analyse de certains ORFs du prophage et de ses sites d'insertions dans le chromosome a été réalisée par une approche PCR sur les souches d'A. salmonicida disponibles au laboratoire. Aussi, pour évaluer la virulence de chacune de ces souches, un test de virulence a été fait avec l'amibe Dictyostelium discoideum, un hôte alternatif reconnu pour ce genre d'analyse. 59 souches d'A. salmonicida ont été étudiées et les résultats obtenus démontrent que plus de la moitié des souches testées sont aussi virulentes que la souche 01-B526. Pour les ORFs ciblés dans le prophage, 11 souches sur 59 possèdent tout le prophage, soit tous les ORFs ainsi que les mêmes sites d'insertions dans le chromosome. Toutes les souches d'A. salmonicida sauf cinq possèdent l'ORF 67 se trouvant dans le prophage de la souche 01-B526. Bref, d'autres analyses seront faites sur les ORFs dans le prophage par une approche PCR pour mieux comprendre la mobilité et sa relation avec la virulence de la bactérie.

La cellulose est le principal polymère de glucose trouvé chez les végétaux et constitue une alternative au maïs comme source de carbone pour l’industrie des biocarburants. La libération des sucres qu’elle contient se bute à la résistance de ce polymère à l’hydrolyse enzymatique, réduisant la compétitivité de cette source carbone. La biotraitement consolidé est une stratégie de réduction des coûts de conversion de la cellulose qui réunit les étapes de production de cellulases, d’hydrolyse de la cellulose et de fermentation. Une telle stratégie nécessite le concours de microorganismes pouvant hydrolyser puis fermenter la cellulose efficacement. Un tel organisme n’existe pas dans la nature. Nous avons donc exprimé trois cellulases hétérologues chez Saccharomyces cerevisiae. La souche résultante produit des quantités modestes d'éthanol à partir de cellulose. Le principal obstacle à la conversion efficace de la cellulose en éthanol par notre souche est sa capacité limitée de sécrétion des protéines. Afin d’augmenter la sécrétion de cellulases, nous avons adopté une stratégie d’évolution dirigée connue sous le nom de battage (shuffling) de génome. Pour permettre le criblage à haut débit des mutants issus de ce battage, nous avons testé une approche de tri cellulaire par cytométrie en flux. Nos expériences préliminaires indiquent que cette approche permet la sélection de mutants au phénotype amélioré, ouvrant par conséquent la voie à une entreprise complète de battage de génome.

Notre laboratoire a récemment caractérisé une nouvelle interaction entre la ligase de l’ubiquitine
Itch et une petite protéine lysosomale encore mal connue LITAF. Cette interaction
peut s’établit grâce à deux motifs PPXY situé dans la portion N-terminale de
LITAF, qui sont reconnus par les domaines WW de Itch. Fait remarquable, la
présence de LITAF dans les cellules en culture modifie la distribution
intracellulaire de Itch, qui passe d’une association avec les compartiments
endosomaux à une localisation lysosomale. Ce déplacement est dépendant de l’association avec LITAF.

Nous avons utilisé différents mutants de LITAF pour déterminer l’influence de la
présence de l’interaction entre LITAF et Itch sur l’activité auto catalytique
de Itch, ainsi que sur sa capacité à interagir et ubiquityler certains de ses
substrats. Nous avons ainsi constaté que l’interaction entre Itch et LITAF
cause une diminution importante du niveau d’expression des deux protéines. Ce
résultat suggère que l’activité catalytique de Itch est fortement stimulée par
l’interaction avec LITAF. De plus, des mutations au niveau de la séquence
codant LITAF sont associées à certaines formes du syndrome neurodégénératif de
Charcot-Marie-Tooth. Cette neuropathie est caractérisée par l’accumulation de
protéines au niveau des cellules. Ces observations suggèrent que LITAF pourrait
agir comme un activateur de la ligase Itch et stimuler son activité, ce qui
accroîtrait l’action de la ligase sur ses substrats.

La virulence d’Aeromonas salmonicida un pathogène de poisson, dépend entre autres du système de sécrétion de type trois (SSTT). Les gènes codant ce système sont presque tous situés sur une région du plasmide pAsa5. En condition de stress, ce plasmide peu se réarranger et perdre la région du SSTT. De plus, le génome d’A. salmonicida est riche en séquences d’insertion (IS), des éléments mobiles pouvant provoquer des réarrangements de l’ADN. Trois copies d’une séquence d’insertion, l’IS11, encadrent les régions qui sont éliminées lors du réarrangement de pAsa5. Nous avons caractérisé par PCR l’implication de l’IS11 dans le réarrangement de souches exemptes de SSTT, produites à partir de trois souches parentales. Nous avons aussi vérifié l’intégrité plasmidique de ces souches et leur vitesse de croissance. La PCR a permis de détecter l'implication des IS11 dans 33% des souches réarrangées, dont toutes les souches dérivées de la souche de référence, A449. Les réarrangements des souches québécoises 01-B526 et 01-B516 sont quant à eux partiellement expliqués par l’action des IS11 tel que détecté par PCR. Aussi, certaines souches réarrangées ont perdu un autre plasmide, pAsal1, suggérant que le stress pourrait compromettre l’intégrité génétique de la bactérie. Finalement, les souches réarrangées ont une vitesse de croissance supérieure à leur souche parentale. Il s’agit d’un premier exemple de réarrangement par séquences d’insertion chez A. salmonicida. ?

L’expression transitoire de gène (ETG) est un bioprocédé rapide et économique, massivement utilisé en recherche et développement pour la production de protéines d'intérêt. Elle consiste à véhiculer du matériel génétique jusqu’aux noyaux de cellules cultivées en bioréacteur afin de les amener à produire une protéine recombinante d’intérêt potentiel. L’un des types de vecteurs les plus utilisés est un auto-assemblage sous forme de nanoparticule entre un polymère cationique et l’ADN exogène. L’obstacle majeur à l’optimisation de ce procédé est que la majorité du matériel génétique ayant été internalisé par les cellules est dégradé par la voie lysosomale. L’objectif de ce projet est le développement d’un vecteur de transfection capable de cibler un récepteur cellulaire afin d’utiliser la voie d’internalisation de ce dernier pour diriger le matériel génétique spécifiquement vers le noyau. Notre vecteur consiste en un polymère cationique que nous avons conjugué avec le peptide Kcoil, capable de former une liaison rigide et orientée avec son peptide partenaire Ecoil. Il devient ainsi possible de fonctionnaliser de manière innovante notre polyplexe par auto-assemblage avec une protéine étiquetée du peptide Ecoil, dans le but de cibler un récepteur cellulaire lors de l’ETG. Une preuve de principe in vitro a été réalisée avec le tandem ligand/récepteur Ecoil-EGF/EGFR sur la lignée cellulaire A431, démontrant la validité ainsi que le potentiel de notre démarche polyvalente.

Grb2 est une protéine adaptatrice impliquée dans la voie de signalisation des tyrosines kinases, notamment celle du facteur de croissance épidermique (EGF), stimulant entre autres la prolifération de divers types cellulaires. Son domaine SH2 permet de lier les tyrosines phosphorylées du récepteur activé, alors que ses deux domaines SH3 peuvent lier des régions riches en prolines (PRD) de plusieurs protéines différentes, notamment SOS, une enzyme activant la voie Ras/MAPK. De plus, Grb2 est impliqué dans l’internalisation du récepteur de l’EGF (EGFR). Itch est une ligase de l’ubiquitine avec un domaine HECT. Celle-ci, en attachant une chaine d’ubiquitines, provoque la dégradation de plusieurs protéines impliquées dans l’endocytose de l’EGFR comme l’endophiline et Cbl. Plusieurs des interactions entre Itch et ces protéines sont faites par le biais de domaines SH3. Malgré cela, le rôle de Itch dans la régulation de la signalisation ainsi que l’internalisation de l’EGFR reste méconnu. Par l’utilisation de chromatographie d’affinité et par transfert de résonnance d’énergie bioluminescente dans des cellules surexprimant différentes constructions de Itch et Grb2, nous avons pu observer une interaction directe entre les deux protéines. Itch permet d’ubiquityler Grb2 mais celui-ci n’est pas dégradé par le protéasome. Nous tentons de déterminer si l’ubiquitylation de Grb2 influence l’activité de ce dernier, particulièrement en ce qui concerne l’internalisation des récepteurs de l’EGF.

L’anémie est un problème de santé humaine très important qui affecte plus de 40% des enfants d’âge préscolaire dans de nombreux pays du tiers monde. Cette situation peut être causée par une consommation de végétaux pauvres en Fe. En effet, l’agriculture dans certains types de sols mène à la production de plantes carencées en Fe.Nous avons étudié la réponse des plantes à une carence en Fe en utilisant des cultures de cellules hétérotrophes de Solanum tuberosum. Le manque de Fe induit un ralentissement important de la croissance des cellules. Le suivi de la multiplication des cellules carencées par cytométrie en flux a mis en évidence un ralentissement du cycle cellulaire et une plus grande proportion de cellules se trouvant dans la phase S. Étant donné que le Fe entre dans la composition de plusieurs protéines de la chaîne de transport d’électrons de la mitochondrie, nous avons caractérisé cette organelle dans les cellules privées de Fe. Nous avons pu mettre en évidence un changement important de la structure des mitochondries par des techniques de microscopie électronique et de microscopie confocale utilisant le marqueur fluorescent mitotraker. Les mesures de respiration cellulaire ainsi que la quantification des activités et des niveaux protéiques d’enzymes clés du métabolisme primaire démontrent des changements importants chez les cellules carencées. Les répercussions sur le métabolisme primaire ont été vérifiées au niveau d’intermédiaires du métabolisme.

Par sa définition sur plusieurs aspects dont la physiologie et la philosophie, l’animal est considéré comme une entité vivante différente de l’être humain. De plus, à la lumière des informations disponibles dans la littérature, l’animal est aussi considéré différemment de l’être humain en fonction de son statut sociétal et en fonction de la vision de son utilité pour l’être humain. De ce fait, les médecins vétérinaires conçoivent l’animal-patient de façon distincte selon l’évaluation de ce que représente ce dernier pour chacun dans leur vie professionnelle et de leur vie personnelle. Ces conceptions de l’animal influencent grandement la vision des professionnels lors de situations vécues dans leur milieu de travail et conséquemment influencent aussi leurs décisions cliniques, particulièrement lors de dilemmes éthiques tels que lors de demande d’euthanasie. En évaluant les divergences au niveau de ces conceptions de l’animal, il sera possible de mieux comprendre les points de vue des vétérinaires interrogés au sujet du dilemme éthique. Où est la place de cet animal dans la relation entre le vétérinaire, le propriétaire de l’animal et ce dernier? Pour tenter de répondre à ces questions cette communication portera sur des résultats d’une étude descriptive qualitative faite à partir d’entrevues avec questions ouvertes permettant de démystifier globalement le sujet.

Le principe de FULCRUM établit qu'un signal stimulant sous de seuil (entrant dans un sens) qui est synchrone avec un signal de facilitation (entrant dans un sens différent) peut être augmenté (jusqu'à un niveau maximal de résonance) et ensuite diminué par l'énergie et le contenu de fréquence du signal de facilitation. En conséquence la sensation du signal stimulant change selon la force de signal de facilitation. Dans ce contexte, les transitions de sensibilité représentent le changement de l'activité sous de seuil à une activité stimulée dans des neurones multi sensorielles. Initialement l'énergie de leur activité (fourni par les signaux faibles) n'est pas assez pour être détecté, mais quand le signal de facilitation entre dans le cerveau, il produit une activation générale parmi des neurones multi sensorielles, modifiant leur activité originale. À notre avis, le résultat est une activation intégrée qui promeut des transitions de sensibilité et les signaux sont alors perçus.

Autrement dit, l'activité créée par l'interaction du signal stimulant (par exemple visuelle) et le signal de facilitation (le bruit tactile) à une certaine énergie spécifique, produit la capacité d'une détection centrale d'un signal autrement faible. Dans ce travail nous présentons et discutons des résultats théoriques et expérimentaux récents qui supportent le principe de Fulcrum.

Eurytemora affinis, un copépode calanoïde, est un complexe d’espèces. Deux de ces clades sont géographiquement séparés dans la zone de turbidité maximale (ZTM) de l’estuaire moyen du St-Laurent. Le clade Atlantique (A) domine les eaux douces (<0,5psu) et le clade Nord-Atlantique (NA) domine les eaux salée (0,5-20psu). La salinité apparait comme le facteur environnemental responsable de cette ségrégation. Seulement, le clade A tolère de fortes salinités (15psu) mais est exclusivement situé dans la zone oligohaline malgré les forts courants de marée. Le but de cette étude est de définir l’habitat et le niveau trophique des deux clades afin de comprendre la ségrégation des deux clades d’E. affinis.Nous suggérons que les valeurs des isotopes stables du carbone (δC¹³) des clades A et NA seront couplées aux valeurs du δC¹³ de la matière organique particulaire (MOP) respectif à leur habitat et qu’ils occuperont le même niveau trophique. Nos résultats révèlent qu’il n’y a pas de différence significative entre le δC¹³ de la MOP d’eau douce et d’eau salée. Par contre, il y a une différence significative du δC¹³ entre le clade A et NA. Le faible δC¹³ du clade A indique une source alimentaire d’eau douce et terrigène, alors que la plus haute valeur du δC¹³ du clade NA indique une origine marine. Ici, la MOP d’eau douce peu supporter l’alimentation du clade A. Mais, le découplage entre la réponse isotopique du clade NA et la MOP d’eau salée suggère un autre processus alimentaire

La présence de la tordeuse des bourgeons de l’épinette, Choristoneura fumirefana, est l’un des plus grands problèmes de l’industrie forestière au Canada. Cet insecte qui fait des ravages sur des cycles d’environ 25-35 ans, affecte considérablement l’approvisionnement en matière ligneuse. Malgré les nombreuses recherches portant sur cet insecte, les connaissances sur l’augmentation, la progression et le déclin des épidémies demeurent encore au stade d’hypothèse. Durant une infestation, la qualité nutritionnelle des arbres varie, ce qui affecte directement la performance de l’insecte. Dans certains cas, la qualité alimentaire peut créer une pression de sélection importante.

L’objectif de la présente étude consiste à identifier les différentes stratégies adaptatives chez la tordeuse des bourgeons de l’épinette en réaction aux variations de sucre et azote. Afin de minimiser la variation environnementale, on analyse 15 000 individus provenant de deux diètes artificielles sur deux générations. La première diète est de bonne qualité lors que l’autre simule les conditions nutritionnelles lors d’une épidémie. Les résultats obtenus montrent que la qualité nutritionnelle affecte plus les femelles que les mâles, les caractères impliqués à court temps sont　: le poids et la durée vie. Cependant, il semble que la fécondité et la survie hivernale possèdent une grande variance additive. Ces caractères sont possiblement deux stratégies importantes dans l’évolution de cet insecte.

Selon les derniers modèles associés aux changements
climatiques, l'augmentation des températures sera caractérisée par des fluctuations
importantes de la température (i.e. pulses de température). La réponse des
organismes face un tel stress thermique est très peu connue et difficile à
prédire en raison des effets directs et indirects (via le niveau trophique
supérieur ou inférieur) de la température sur chaque niveau trophique. Dans cette
optique, nous avons réalisé des expériences en chambre de croissance pendant
lesquelles nous avons exposés un système tritrophique
(poivron-puceron-coccinelle) à des pulses de température. Nos résultats
démontrent que plus les pulses sont fréquents et intenses moins les pucerons
sont abondants en raison d’une diminution de leur fécondité. En revanche, le
contrôle des populations de pucerons par les coccinelles diminuent fortement lorsqu’on
augmente les pulses de température. Les pulses ne semblent pas avoir d’effet
sur la biomasse des plants de poivron. Dans l’ensemble, nos résultats suggèrent
un effet négatif des pulses de température sur l’abondance des pucerons et sur
leur contrôle par les coccinelles. Notre étude met aussi en évidence la
difficulté de distinguer les effets directs des effets indirects des
changements climatiques sur des systèmes complexes à plusieurs niveaux trophiques.

La cryptosporidiose bovine, causée par le parasite Cryptosporidium parvum, entraîne de la diarrhée et de la déshydratation chez les veaux nouveau-nés du Québec. Un taux de mortalité jusqu'à 10% est associé à cette maladie lorsque combinée à d'autres infections. Nous avançons l'hypothèse qu'injecter un vaccin sous-unitaire multivalent anti-C. parvum à des vaches en fin de gestation entraînera la production d'anticorps dans le colostrum qui protègeront passivement les veaux. Nous avons identifié, grâce à des analyses bioinformatiques, la portion la plus immunogénique de chacune des six protéines de surface de C. parvum à l'étude. La clonage de la séquence dans un vecteur d'expression a permis la purification de ces protéines. Des anticorps polyclonaux spécifiques à ces protéines seront utilisés lors d'études in vitro utilisant des cellules bovines. Le but étant de caractériser l'effet de ces anticorps sur le caractère infectieux de C. parvum. Les anticorps prometteurs seront mis à l'épreuve lors d'études in vivo où des souris immunocompromises seront traitées avec ces anticorps et infectées avec C. parvum. L'évolution des signes cliniques des souris (traitées vs contrôle) permettra de définir l'efficacité de ces anticorps à prévenir la cryptosporidiose. Ce projet correspond aux premiers pas dans l'élaboration d'un vaccin contre la cryptosporidiose bovine, une maladie pour laquelle nous, vétérinaires québécois, ne disposons d'aucun outil thérapeutique efficace pour la contrôler.

Un grand nombre d’études d'association pan-génomiques ont été réalisées en utilisant des variations en nombre de copies (CNV) rares. La capacité à détecter une association repose sur la précision de la détection des CNV ainsi que sur les filtres utilisés lors du contrôle de qualité. Différents critères, seuils ou définitions se traduiront par une liste finale de CNV très différente en raison d’un changement dans les taux de faux positifs et de faux négatifs. L’objectif de la présente étude est de comparer les CNV obtenus à partir de deux plateformes de génotypage et selon des critères de contrôle de qualité variables. Des échantillons témoins (environ 9000) ainsi que des réplicats de NA12878 (HapMap) génotypés à l’aide des puces Affymetrix et Illumina ont été utilisés. Le taux de concordance des CNV entre les réplicats de NA12878 et les données du 1000 Genome Project peut varier de 99 % à 46 %, selon le seuil ou la méthode choisis. Le fardeau de CNV entre deux groupes fluctue aussi, allant de 1 (aucun changement) à 1,14 (augmentation significative après un million de permutations). Finalement, la proportion de transcrits de gène chevauchés par des CNV est généralement plus haute que celle attendue par hasard (5800 permutations). Cette étude souligne les difficultés sous-jacentes à l’étude des CNV rares et montre qu’une légère différence dans la définition des CNV peut mener à de fausses associations.

La confusion est une source de biais important en épidémiologie. Le score de propension est une méthode populaire pour la contrôler dans les études prospectives et le score de stratification représente un score d’équilibrage est utilisé pour les études rétrospectives. Notre étude évalue l’efficacité du score d’équilibrage en génétique.

Nous comparons 3 méthodes : la stratification du score (SS), l’appareillement au score (AS) et l'ajustement pour le score (CAS). Nous avons simulé des données génétiques avec 6 covariables déséquilibrées entre cas et témoins. Pour chacun des 4000 sujets simulés, les génotypes de 10 SNP dont un SNP confondant sont générés. Nous avons évalué la puissance de chacune des 3 méthodes à identifier les effets génétiques et le taux d’erreur de type I. Les 3 méthodes ont une puissance de 100% pour détecter le SNP causal avec une fréquence allélique mineure de 0,30. L'erreur de type I est (0,053, 0,049 et 0,053) pour le CAS, SS et AS. Avec un MAF de 0,05, la puissance de détecter le SNP associé est 49,9%, 52,8% et 16,4% respectivement. Le taux d'erreur de type I est 0,014, 0,024 et 0.010. Pour le SNP confondant, le taux d’erreur de type I est .047, .045, et .055 pour CAS, SS et AS.

La méthode par stratification (SS) est plus puissante et a un faible taux de faux positifs. D’autres investigations sont en cours pour explorer la puissance de ces 3 méthodes à identifier un effet génétique en présence d’effet confondant élevé

La coccidiose reste encore un problème majeurs dans les élevages de poulets, car elle entraine des pertes économiques considérables dues en partie au taux de morbidité élevé dans les exploitations et aux faibles résultats zootechniques. Le contrôle des coccidioses chez le poulet est basé sur des moyens prophylactiques, utilisant des produits actifs sur les coccidies et bien récemment la vaccination, mais cette dernière reste inefficace. Des stratégies alternatives ont été développées pour un contrôle efficace des coccidioses. C’est le cas de l’association d’un anticoccidien ionophore, le lasalocide sodium (100 ppm) et un complexe prébiotique (ß glucanes et mono-oligosaccharides) sous forme d’additifs granulés (0.5 ppm).Les résultats ont montré que l’utilisation du prébiotique en association avec l’anticoccidien ionophore permet d’améliorer la santé de poulet de chair et de contrôler efficacement la coccidiose lors d’une exposition naturelle à la maladie. Ceci se traduit par une amélioration des performances zootechniques (indice de conversion, ingeré alimentaire et gain de poids) , une stimulation de l’immunité des poulets (augmentation des cellules lymphocitaires et de l'indice des organes immunitaires) et une diminution de la réplication des coccidies et des scores lésionnels.

La dérégulation des protéines ribosomiques peut engendrer de graves maladies comme le cancer et la maladie d’Alzheimer. Une meilleure compréhension de leurs rôles pourrait ouvrir de nouvelles voies de thérapies afin de détecter, traiter ou prévenir ces maladies. Chez la levure Saccharomyces cerevisiae, la protéine ribosomique S18 est exprimée à partir de gènes dupliqués qui génèrent des protéines de séquences identiques (S18A et S18B). Nos résultats d’immunoprécipitations indiquent que S18 est associée à plusieurs petites ribonucléoprotéines nucléolaires (snoRNP). Cependant, S18A et S18B n’interagissent pas de la même façon avec ces snoRNP. Ceci suggère que S18A et S18B pourraient avoir des fonctions cellulaires différentes. Certaines protéines ribosomiques ont des rôles « extra-ribosomiques ». Les protéines S18A ou S18B pourraient non seulement avoir un rôle dans le ribosome mais aussi dans la biogenèse des ARNr lorsqu’elles sont associées à ces différentes snoRNP. Nos résultats montrent que S18 est essentielle à la maturation de l’ARNr 18S et que l’absence de S18A ou S18B affecte de façon différente la formation des ribosomes, l’association de S18 avec les snoRNAs et la maturation des ARNr.

La biogenèse des ribosomes dans le nucléole est un processus complexe et finement régulé. Plus de 200 facteurs nucléolaires sont nécessaires pour générer les sous-unités 40S et 60S du ribosome. Nos travaux portent sur Dbp4, une ARN hélicase essentielle à la production d’ARNr 18S chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Dbp4 est très conservée et l’on retrouve des orthologues chez tous les eucaryotes.

Nous avons trouvé que Dbp4 participe à la maturation des pré-ARNr en formant un complexe avec les protéines Enp2 et Bfr2, dont les homologues chez l’humain sont respectivement NOL10 et AATF («apoptosis antagonizing transcription factor»). Nos expériences d’immunoprécipitation indiquent que Dbp4 s’associe à Bfr2 et Enp2. Nos analyses de sédimentation dans des gradients de sucrose ont révélé que Dbp4, Bfr2 et Enp2 co-sédimentent dans un complexe de 50S et 80S. Le profil de sédimentation de Dbp4 change pendant la déplétion de Bfr2 ou Enp2. Dbp4, Bfr2 et Enp2 s’associent au snoRNA U3 et à Mpp10, une protéine spécifique à U3. Ces protéines sont également impliquées dans les premiers clivages qui mènent à la maturation de l'ARN 18S. La déplétion de Bfr2 ou Enp2 affecte le profil de sédimentation de U3. Ces résultats suggèrent que Dbp4, Bfr2 et Enp2 sont possiblement des composants du SSU processome. Nous proposons que Dbp4, Bfr2 et Enp2 sont impliquées dans les réarrangements structuraux et les interactions moléculaires qui facilitent la formation et la fonction du SSU processome.

La biogenèse des ribosomes est un processus biologique essentiel à la croissance des cellules et à leur prolifération. Les principales étapes de ce processus sont effectuées dans le nucléole. Afin de mieux comprendre les mécanismes qui régulent la biogenèse des ribosomes, nous utilisons la levure Saccharomyces cerevisiae comme modèle puisque c’est dans cet organisme que ce processus est le plus étudié.

Nop6 est une protéine nucléolaire constituée d’un domaine de liaison à l’ARN (RRM) flanqué de deux motifs « coiled-coil » (CC). La présence des CC suggère que Nop6 pourrait interagir avec d’autres protéines. Nous avons utilisé le système double hybride chez la levure pour déterminer comment Nop6 interagit avec Rrt5, une protéine impliquée dans la transcription de l’ARN ribosomique. Nos résultats indiquent que Nop6 interagit fortement avec Rrt5. Étonnamment, la délétion des deux domaines CC de Nop6 n’a pas empêché son interaction avec Rrt5. Ce résultat suggère que c’est le RRM de Nop6 qui est nécessaire à l’interaction. Des expériences d’immunoprécipitation et « GST-pulldown » ont confirmé l’interaction Nop6-Rrt5. Curieusement, Nop6 et Rrt5 co-localisent seulement durant la sporulation, suggérant un possible rôle pour Nop6 dans la méiose. Nous avons également fait un crible double hybride avec Nop6 comme appât et nous avons identifié un nouveau partenaire putatif, Fir1. La caractérisation approfondie de l’interactions de Nop6 et Fir1 est en cours.